該試劑盒使用專(zhuān)有染料,可根據(jù)線(xiàn)粒體膜電位梯度選擇性累積在線(xiàn)粒體中。線(xiàn)粒體指示劑是一種疏水性化合物,可以很容易地滲透完整的活細(xì)胞,并在進(jìn)入細(xì)胞后被保留在線(xiàn)粒體中,該熒光線(xiàn)粒體指示劑長(zhǎng)時(shí)間保留在線(xiàn)粒體中,因?yàn)樵撝甘緞в卸ㄎ患?xì)胞的基團(tuán),這一關(guān)鍵特征顯著提高了染色效率。該試劑盒設(shè)計(jì)十分穩(wěn)定,需要很少的動(dòng)手操作時(shí)間。它適用于各種熒光平臺(tái),如酶標(biāo)儀分析、免疫組化和流式細(xì)胞術(shù);它廣泛用于多種熒光研究,包括細(xì)胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞,可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
C0603 | Cell Navigator 線(xiàn)粒體標(biāo)記試劑盒 紅色熒光 | 500 Assays | 2544RMB |
樣品分析
1.準(zhǔn)備線(xiàn)粒體染色溶液:
1.1將所有組件溫度調(diào)至室溫。
1.2通過(guò)將20μLMitolite Red(組分A)稀釋到10mL活細(xì)胞染色緩沖液(組分B)中制備染料工作溶液。
注1:對(duì)于一個(gè)96孔板,20μL的500X Mitolite Red(組分A)就足夠了。在≤-20oC下等分并儲(chǔ)存未使用的500X Mitolite Red。避光,避免反復(fù)凍融循環(huán)。
注2:熒光線(xiàn)粒體指示劑的最佳濃度根據(jù)具體應(yīng)用而變化??梢愿鶕?jù)特定細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞或組織對(duì)探針的滲透性來(lái)修改染色條件。
2.準(zhǔn)備和染色細(xì)胞:
2.1對(duì)于粘附細(xì)胞:在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合時(shí),加入等體積(例如對(duì)于96孔板為100μL,對(duì)于384孔板為25μL)的染料加工溶液(來(lái)自步驟1.2)。將細(xì)胞在37oC,5%CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液(HH緩沖液)或您選擇的緩沖液(例如濃度為1:1的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩沖液)替換染料上樣溶液。
注意:如果細(xì)胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。
2.2對(duì)于懸浮細(xì)胞:以1000rpm離心細(xì)胞5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀并吸出上清液。在預(yù)熱(37℃)生長(zhǎng)培養(yǎng)基中輕輕重懸細(xì)胞沉淀,并加入等體積的染料加工溶液(來(lái)自步驟1.2)。將細(xì)胞在37oC,5%CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液(HH緩沖液)或您選擇的緩沖液(例如濃度為1:1的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩沖液)替換染料上樣溶液。
注1:如果細(xì)胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,建議增加標(biāo)記濃度或培養(yǎng)時(shí)間以使染料積累。
注2:懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak?(BD Biosciences)處理過(guò)的蓋玻片上,并作為粘附細(xì)胞染色(見(jiàn)步驟2.1)。